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雙熒光素酶檢測是轉錄調控研究中十分重要的實驗手段，主要應用于啟動子和轉錄因子，以及miRNA和其靶基因互作的驗證。

在雙熒光素酶檢測中，將螢火蟲熒光素酶作為實驗報告基因，海腎熒光素酶作為對照報告基因。實驗報告基因用于測試實驗條件下基因的表達，而對照報告基因作為內對照。

以熒光素為底物來檢測螢火蟲熒光素酶活性，熒光素酶可以催化熒光素，在熒光素氧化的過程中會發出生物熒光，然后通過化學發光儀測定。